Tez-tez so'raladigan savollar(TSS)
1.Savol: Nima uchun ranglar bir-biriga bog'langan?
A:Multipleks tasvirlashda o'zaro bog'liqlik va boshqa muammolarga bir nechta ta'sir ko'rsatishi mumkin
omillar:
A.Tasvirlash uskunasi filtrining tarmoqli kengligi:
Crosstalk tasvirlash tizimida ishlatiladigan filtrlarning tarmoqli kengligi bilan bog'liq bo'lishi mumkin. Spektrlarning bir-biriga mos kelishini kamaytirish va signalni ajratishni yaxshilash uchun tor to'lqin uzunligi tarmoqli kengligi bilan filtrlardan foydalanish tavsiya etiladi.
B.Oldingi antikorlarning to'liq bo'lmagan elyusiyasi:
CK (sitokeratin) kabi yuqori yaqinlikka ega bo'lgan antikorlar uchun yuvish bosqichi etarli bo'lmasa, to'liq bo'lmagan elyusiya paydo bo'lishi mumkin. Bunday hollarda oldingi antikorni to'liq olib tashlashni ta'minlash uchun elutsiya shartlarini uzaytirish (masalan, harorat yoki inkubatsiya vaqtini oshirish) kerak bo'lishi mumkin.
C.Signal nomutanosibligi:
O'zaro bog'lanish qo'shni kanallar orasidagi signal intensivligining nomutanosibligidan ham kelib chiqishi mumkin. Agar bitta bo'yoq boshqasiga qaraganda ancha kuchli signalga ega bo'lsa, kuchliroq signal qo'shni kanalga to'kilib, noto'g'ri yoki kiruvchi signallarga olib kelishi mumkin. Antikor kontsentratsiyasini va tasvir sozlamalarini diqqat bilan optimallashtirish bu ta'sirni minimallashtirishga yordam beradi.
D.Boshqa mumkin bo'lgan sabablar:
O'zaro bog'lanishga hissa qo'shadigan qo'shimcha omillar orasida antikorlarning aralashmalari, noto'g'ri yuvish yoki raundlar orasidagi elutsiya yoki antigenni olish bilan bog'liq muammolar bo'lishi mumkin. Har bir qadamni diqqat bilan tekshirish ish jarayonining to'g'riligini ta'minlaydi va xatolar ehtimolini kamaytiradi.
Ushbu omillarni ko'rib chiqish orqali siz multipleks ko'rish natijalarini optimallashtirishingiz va kanallararo shovqinni minimallashtirishingiz mumkin.
2.Savol: TYR-xxxPlus lyuminestsent bo'yoq va TSA buferining suyultirish nisbatini qanday optimallashtirishim mumkin?
A:Ushbu to'plam nisbatan yuqori sezuvchanlikni namoyish etadi, an'anaviy TSA to'plamlariga qaraganda 10-50 baravar sezgir. Haddan tashqari kuchdan qochish uchun signalning intensivligini kuzatish muhimdir. Agar signal juda kuchli bo'lsa, bo'yoq konsentratsiyasini, reaktsiya vaqtini yoki asosiy antikor kontsentratsiyasini kamaytirishni o'ylab ko'ring. Aksincha, agar signal juda zaif bo'lsa, siz bo'yoq konsentratsiyasini, reaktsiya vaqtini yoki asosiy antikor konsentratsiyasini oshirishingiz mumkin. Ushbu to'plamning o'ziga xos xususiyati shundaki, yuqori bo'yoq konsentratsiyasi signalning eksponentsial kuchayishiga olib keladi. 1:50 suyultirish eng kuchli signalni beradi, 1:500 suyultirish esa an'anaviy TSA signali bilan taqqoslanadi. Shunday qilib, maksimal signal kuchi uchun optimal suyultirish 1:50, an'anaviy TSA signaliga mos keladigan 1:500.
3.Q: Tegishli antigenni tuzatish usulini yoki antikorlarni tozalash usulini qanday tanlash mumkin?
Javob: Antigen ta'mirlashning birinchi bosqichini joylashtirish tavsiya etiladi bo'limlarEDTA antijenini tiklash eritmasida 95 ℃ da pH qiymati 9,0 bo'lgan 15-25 daqiqa davomida; ikkinchi tur yoki undan ko'p antikor elyusiyasi, uni joylashtirish tavsiya etiladi bo'limlarlimon kislotasi antigenini tiklash eritmasida 95 ℃ da pH qiymati 6,0 bo'lgan 25 min-40 minut davomida, tilimdan osongina tushib ketadigan ba'zi to'qimalar uchun antikor elusiyasi antikorlarni tozalash eritmasida qo'llanilishi mumkin (bizning kompaniyamiz tomonidan sotiladi). RC-010), antikor eluent vaqti juda uzun bo'lsa, antigenni tanib olishning pasayishiga olib kelishi mumkin / DAPI yadroviy zaif binoni, antikor elimentining vaqtini nazorat qilishga e'tibor bering (umuman xona harorati yoki 37 ℃ 5-15 min, 1-2 marta qoniqarliroq natijalar bo'lishi mumkin).
4.Savol: Bo'yoqlarni yorug'likdan himoya qilish kerakmi?
Javob: Ushbu to'plamdagi lyuminestsent bo'yoqlar o'chirishga juda chidamli va butun jarayon davomida lyuminestsent lampalar ostida yorug'likdan himoyalanishga hojat yo'q, foydalanish paytida ularni qorong'i muhitda ishlatish shart emas, lekin ularni quyosh nuri ostida nurlantirmaslik kerak.
5.Savol: Bir nechta yorliqlashda indikatorlar/antikorlar tartibini qanday tanlash mumkin?
Javob: Elutsiya qilish qiyin bo'lgan antikorlar oxirgi turda joylashtirilishi kerak, aks holda ranglarni bog'lash oson va oldingi turlarda (masalan, foxp3) qiyinroq ko'rsatkichlar joylashtirilishi kerak va birinchi turda odatda EDTA 9.0 ta'mirlash uchun mos bo'lgan ko'rsatkichlarni bajarish kerak; kompaniyamiz tajribasiga ko'ra, birinchi turda odatda EDTA 9.0 suv hammomi usuli / limon kislotasi 6.0 yuqori bosimli usuli, ikkinchi tur va yuqorida esa odatda limon kislotasi 6.0 yuqori bosimli usuli qo'llaniladi va ko'p antikorlar limon kislotasi 6.0 yuqori bosimli usulidan foydalanish tavsiya etiladi. Limon kislotasi 6.0 avtoklav usuli barcha ko'p antikorlar uchun tavsiya etiladi.
6.Savol: Nima uchun ba'zida noaniqlik paydo bo'ladi va uni qanday yaxshilash mumkin?
Javob: Noaniqlik bir necha omillardan kelib chiqishi mumkin:
Poliklonal antikorlar: Ushbu antikorlar o'ziga xos bo'lmagan bog'lanishga ko'proq moyil bo'ladi. O'ziga xoslikni yaxshilash uchun monoklonal antikorga o'tish yoki antigenni tiklash jarayonining kontsentratsiyasini va intensivligini kamaytirishni ko'rib chiqing.
Signalning haddan tashqari ko'payishi: Agar signalni kuchaytirish juda kuchli bo'lsa, bu o'ziga xos bo'lmagan bo'yashga olib kelishi mumkin. Reaktsiya vaqtini yoki binoni eritmasining konsentratsiyasini kamaytirish bu muammoni yumshatishga yordam beradi.
Birlamchi antikorning yuqori konsentratsiyasi:Juda yuqori konsentratsiyadan foydalanish ham o'ziga xos bo'lmasligiga hissa qo'shishi mumkin. Natijalarni yaxshilash uchun birlamchi antikorning pastroq suyultirish nisbatidan foydalaning yoki tuzatish eritmasining harorati, davomiyligi yoki pH ni sozlash orqali tuzatish intensivligini kamaytiring.
Ushbu omillarni bartaraf etish orqali siz binoni o'ziga xosligini oshirishingiz mumkin.
7.Savol: Parafin bo'limlarining mIHC uchun antikorlarni qanday tanlash mumkin?
Javob: Optimal natijalarga erishish uchun imkon qadar monoklonal antikorlardan foydalanish tavsiya etiladi. Immunohistokimyo (IHC), multipleks immunohistokimyo (mIHC) yoki parafin o'rnatilgan bo'limlarda IHC (IHC-P) uchun maxsus mo'ljallangan antikorlarni tanlang. Bundan tashqari, nokaut tajribalari orqali tasdiqlangan antikorlarga ustunlik bering, chunki bu ularning o'ziga xosligi va ishonchliligini ko'proq kafolatlaydi.
8.Savol: Ushbu to'plam boshqa import yoki mahalliy to'plamlardan qanday afzalliklarga ega?
Javob: iqtisodiy samaradorlik: Bizning to'plam 10 000 dan oshib ketadigan boshqa brendlardan farqli o'laroq, narxlari 2000 dan 10 000 gacha bo'lgan ajoyib qiymatni taklif etadi.
Barqarorlik: Ushbu to'plam mukammal barqarorlikni namoyish etadi. Xona haroratida tasodifan bir oygacha saqlansa ham, aniqlash signalining sezgirligi o'zgarmaydi. HuilanBio tomonidan ishlab chiqilgan ushbu to'plam turli xil himoya vositalari, konservantlar va H ni o'z ichiga olgan eng yangi formulalardan foydalanadi.2THE2barqarorligini sezilarli darajada oshirish uchun stabilizatorlar.
Ultra yuqori sezuvchanlik: Bizning to'plam bozordagi raqobatdosh mahsulotlardan 10 dan 50 baravar yuqori ishlash darajasiga erishib, misli ko'rilmagan sezgirlikni ta'minlaydi.