Questions fréquemment posées(FAQ)
1.Q : Pourquoi les couleurs sont-elles enchaînées ensemble ?
UN:La diaphonie et d’autres problèmes dans l’imagerie multiplex peuvent être influencés par plusieurs facteurs.
facteurs:
UN.Bande passante du filtre de l'équipement d'imagerie :
La diaphonie peut être liée à la bande passante des filtres utilisés dans le système d'imagerie. Il est recommandé d'utiliser des filtres avec des bandes passantes de longueur d'onde étroites pour minimiser le chevauchement spectral et améliorer la séparation des signaux.
B.Élution incomplète des anticorps précédents :
Pour les anticorps à forte affinité, comme la CK (cytokératine), une élution incomplète peut se produire si l'étape de lavage est insuffisante. Dans de tels cas, il peut être nécessaire d'étendre les conditions d'élution (par exemple, en augmentant la température ou le temps d'incubation) pour garantir l'élimination complète de l'anticorps précédent.
C.Déséquilibre du signal :
La diaphonie peut également résulter d'un déséquilibre de l'intensité du signal entre les canaux adjacents. Si un colorant a un signal beaucoup plus fort qu'un autre, le signal le plus fort peut déborder sur le canal adjacent, ce qui entraîne des signaux erronés ou indésirables. Une optimisation minutieuse des concentrations d'anticorps et des paramètres d'imagerie peut aider à minimiser cet effet.
D.Autres causes potentielles :
D'autres facteurs peuvent contribuer à la diaphonie, notamment les mélanges d'anticorps, un lavage ou une élution incorrects entre les cycles ou des problèmes de récupération d'antigènes. La vérification minutieuse de chaque étape garantit un flux de travail approprié et réduit le risque d'erreurs.
En prenant en compte ces facteurs, vous pouvez optimiser vos résultats d’imagerie multiplex et minimiser les interférences entre canaux.
2.Q : Comment puis-je optimiser le rapport de dilution du colorant fluorescent TYR-xxxPlus et du tampon TSA ?
UN:Ce kit présente une sensibilité relativement élevée, étant 10 à 50 fois plus sensible que les kits TSA conventionnels. Il est important de surveiller l'intensité du signal pour éviter une force excessive. Si le signal est trop fort, envisagez de réduire la concentration de colorant, le temps de réaction ou la concentration de l'anticorps primaire. Inversement, si le signal est trop faible, vous pouvez augmenter la concentration de colorant, le temps de réaction ou la concentration de l'anticorps primaire. La caractéristique unique de ce kit est que des concentrations de colorant plus élevées conduisent à une amélioration exponentielle du signal. Une dilution de 1:50 produit le signal le plus fort, tandis qu'une dilution de 1:500 est comparable au signal du TSA conventionnel. Ainsi, la dilution optimale pour une force de signal maximale est de 1:50, 1:500 correspondant au signal du TSA conventionnel.
3.Q : Comment choisir la méthode de réparation d’antigène ou la méthode d’élution d’anticorps appropriée ?
A : Le premier cycle de réparation antigénique est recommandé pour placer le sectionsdans une solution de réparation d'antigène EDTA à 95 ℃ avec une valeur de pH de 9,0 pendant 15 à 25 minutes ; lors du deuxième tour ou plus d'élution d'anticorps, il est recommandé de placer le sectionsFrançais : dans une solution de réparation d'antigène d'acide citrique à 95 ℃ avec une valeur de pH de 6,0 pendant 25 min à 40 min, pour certains tissus qui tombent facilement de la tranche, l'élution d'anticorps peut être utilisée dans la solution d'élution d'anticorps (vendue par notre société.) : Pour certains tissus qui tombent facilement, l'élution d'anticorps peut être utilisée (nous vendons : éluant d'anticorps spécial mIHC, numéro d'article : RC-010), le temps d'élution de l'anticorps est trop long peut entraîner une diminution de la reconnaissance de l'antigène / une faible coloration nucléaire DAPI, faites attention à contrôler le temps d'élution de l'anticorps (généralement température ambiante ou 37 ℃ 5-15 min, 1 à 2 fois peuvent être des résultats plus satisfaisants).
4.Q : Les colorants doivent-ils être protégés de la lumière ?
R : Les colorants fluorescents de ce kit sont très résistants à l'extinction et n'ont pas besoin d'être protégés de la lumière sous des lampes fluorescentes pendant tout le processus, ni d'être utilisés dans des environnements sombres pendant leur utilisation, mais ils ne doivent pas être irradiés sous la lumière du soleil.
5.Q : Comment choisir l’ordre des indicateurs/anticorps lors d’un étiquetage multiple ?
R : Les anticorps difficiles à éluer doivent être placés dans le dernier tour, sinon il est facile d'enchaîner les couleurs, et les indicateurs plus difficiles doivent être placés dans les tours précédents (par exemple foxp3), et le premier tour consiste généralement à faire les indicateurs qui conviennent à la réparation EDTA 9.0 ; selon l'expérience de notre société, le premier tour consiste généralement à utiliser la méthode du bain-marie EDTA 9.0/méthode haute pression acide citrique 6.0, et le deuxième tour et les précédents consistent généralement à utiliser la méthode haute pression acide citrique 6.0, et les multi-anticorps sont suggérés d'utiliser la méthode haute pression acide citrique 6.0. La méthode autoclave acide citrique 6.0 est recommandée pour tous les multi-anticorps.
6.Q : Pourquoi une non-spécificité se produit-elle parfois et comment peut-elle être améliorée ?
A : La non-spécificité peut résulter de plusieurs facteurs :
Anticorps polyclonaux : Ces anticorps sont plus susceptibles de se lier de manière non spécifique. Pour améliorer la spécificité, envisagez de passer à un anticorps monoclonal ou de réduire la concentration et l'intensité du processus de réparation de l'antigène.
Amplification excessive du signal : Si l'amplification du signal est trop forte, cela peut entraîner une coloration non spécifique. La réduction du temps de réaction ou de la concentration de la solution de coloration peut aider à atténuer ce problème.
Forte concentration d'anticorps primaire :L'utilisation d'une concentration trop élevée peut également contribuer à la non-spécificité. Pour améliorer les résultats, utilisez un taux de dilution plus faible de l'anticorps primaire ou diminuez l'intensité de la réparation en ajustant la température, la durée ou le pH de la solution de réparation.
En tenant compte de ces facteurs, vous pouvez améliorer la spécificité de votre coloration.
7.Q : Comment choisir les anticorps pour l'IHCm des coupes en paraffine ?
R : Pour des résultats optimaux, il est recommandé d'utiliser des anticorps monoclonaux dans la mesure du possible. Sélectionnez des anticorps spécifiquement conçus pour l'immunohistochimie (IHC), l'immunohistochimie multiplex (mIHC) ou l'IHC sur des coupes incluses en paraffine (IHC-P). De plus, privilégiez les anticorps qui ont été validés par des expériences de knock-out, car cela offre une meilleure assurance de leur spécificité et de leur fiabilité.
8.Q : Quels sont les avantages de ce kit par rapport aux autres kits importés ou nationaux ?
A : Rentabilité : Notre kit offre un rapport qualité-prix exceptionnel, avec des prix variant entre 2 000 et 10 000, contrairement à d'autres marques qui dépassent souvent les 10 000.
Stabilité: Ce kit présente une excellente stabilité. Même s'il est stocké accidentellement à température ambiante pendant un mois, la sensibilité du signal de détection reste inchangée. Développé par HuilanBio, ce kit utilise les dernières formulations, incorporant divers agents protecteurs, conservateurs et H2LE2stabilisateurs pour améliorer considérablement sa stabilité.
Sensibilité ultra-élevée : Notre kit offre une sensibilité inégalée, atteignant des niveaux de performance 10 à 50 fois supérieurs à ceux des produits concurrents du marché.