Introduction au principe :
Le principe de l'immunohistochimie multiplex (mIHC) est que l'antigène présent sur les coupes de tissus se lie spécifiquement à l'anticorps primaire. Ensuite, un anticorps secondaire conjugué à la peroxydase de raifort (HRP) est ajouté pour se lier à l'anticorps primaire. Après avoir ajouté le substrat de fluorescence tyramine, nLes substrats de fluorescéine tyramine non activés sont activés par le peroxyde d'hydrogène catalysé par HRP. Lors de l'ajout d'un substrat de fluorescéine, le substrat de fluorescéine tyramine non activé est activé catalytiquement par HRP en présence de peroxyde d'hydrogène. Le substrat activé se lie de manière covalente aux résidus protéiques proches, notamment le tryptophane, l'histidine et la tyrosine, permettant une liaison antigène-fluorescéine stable.
Dans les expériences de marquage multiplex, les anticorps primaires et secondaires liés de manière non covalente du cycle précédent peuvent être éliminés par lavage à l'aide d'une réparation thermique ou d'un éluant d'anticorps. Par la suite, le cycle suivant d'anticorps primaires-HRP secondaires est incubé, suivi de l'application d'un substrat de tyrosine fluorescéine différent. Ce processus peut être répété pour réaliser plusieurs étapes de marquage. Étant donné qu'un seul anticorps est incubé à la fois dans chaque système, il n'y a pas de problème de réactivité croisée des anticorps ou de nécessité de faire correspondre les anticorps primaires et secondaires, ce qui réduit considérablement les défis associés à la sélection et à la correspondance des anticorps de différentes espèces dans la conception expérimentale.
Le kit contient des colorants fluorescents spécifiques à la tyramine, qui incluent un ou plusieurs des éléments suivants : TYR-480Plus, TYR-520Plus, TYR-570Plus, TYR-620Plus, TYR-690Plus et TYR-780Plus. Ces colorants fluorescents peuvent être utilisés individuellement ou en combinaison, permettant une amplification de fluorescence simple, double, triple ou même plus complexe et un marquage d'anticorps homologue, améliorant ainsi considérablement la polyvalence du kit.
Notre Les kits Multi Fluorescence Staining Plus (mIHC) peuvent actuellement produire jusqu'à 9 couleurs. Les combinaisons de colorants sont détaillées dans le tableau ci-dessous :
Composants du kit :
Colorants fluorescents TYR-***PlusTampon TSA, anticorps secondaire universel anti-souris/lapin de chèvre HRP, solution de coloration DAPI (prête à l'emploi), diluant d'anticorps, peroxyde d'hydrogène à 3 %.
Avantages de la coloration multifluorescence Plus(mIHC) Kits:
1.Haute sensibilité, 10 à 50 fois supérieure à celle des kits d’analyse TSA conventionnels,
2.Veillez à ne pas avoir un signal trop fort ; si le signal est trop fort, la concentration du colorant/le temps de réaction/la concentration de l'anticorps primaire seront réduits,
3.Si le signal est trop faible, augmentez la concentration du colorant/le temps de réaction/la concentration de l’anticorps primaire ;
4.Plus la concentration des kits Multi Fluorescence Staining Plus (mIHC) est élevée, plus le signal est amélioré de manière exponentielle ; 1 : 50 peut obtenir le signal le plus fort et 1 : 500 équivaut au signal d'un kit TSA conventionnel.
5.Le kit de coloration multifluorescence Plus (mIHC) présente une forte résistance à l'extinction des colorants fluorescents et ne nécessite pas d'exposition au soleil tout au long du processus. Il ne nécessite pas non plus de fonctionnement dans un environnement sombre pendant l'utilisation, mais ne peut pas être exposé au soleil.
Procédure de coloration opérationnelle:
Exemple d'imagerie utilisant notreKit de coloration multifluorescence Plusm:
(A) Tissu de la trompe de Fallope humaine, index A (570 jaune) + index B (520 vert) + index C (690 poudre) ;
(B) Tissu rénal de souris, index A (570 jaune) + index B (520 vert) + index C (690 poudre) ;
(C) Indicateur de tumeur cancéreuse gastrique humaine A (poudre 690) + indicateur B (rouge 620) + indicateur C (jaune 570) + indicateur D (vert 520) ; (D) Index de tissu intestinal humain A (jaune 570) + index B (vert 520) + index C (rose 690) + index D (rouge 620) + index E (vert 480).
