Introducción del principio:
El principio de la inmunohistoquímica multiplex (mIHC) es que el antígeno en las secciones de tejido se une específicamente al anticuerpo primario. Luego, se agrega un anticuerpo secundario conjugado con peroxidasa de rábano picante (HRP) para unirse al anticuerpo primario. Después de agregar el sustrato de fluorescencia de tiramina, norteLos sustratos de fluoresceína de tiramina activados se activan mediante peróxido de hidrógeno catalizado por HRP.. Al añadir un sustrato de fluoresceína, el sustrato de fluoresceína de tiramina no activado se activa catalíticamente mediante HRP en presencia de peróxido de hidrógeno. El sustrato activado se une covalentemente a los residuos proteicos cercanos, incluidos el triptófano, la histidina y la tirosina, lo que permite una unión estable entre el antígeno y la fluoresceína.
En los experimentos de etiquetado multiplex, los anticuerpos primarios y secundarios unidos de forma no covalente de la ronda anterior se pueden eliminar mediante reparación por calor o un eluyente de anticuerpos. Posteriormente, se incuba la siguiente ronda de anticuerpo primario-secundario HRP, seguida de la aplicación de un sustrato de fluoresceína de tirosina diferente. Este proceso se puede repetir para lograr múltiples pasos de etiquetado. Dado que solo se incuba un anticuerpo a la vez en cada sistema, no existe preocupación por la reactividad cruzada de anticuerpos ni por la necesidad de combinar anticuerpos primarios y secundarios, lo que reduce significativamente los desafíos asociados con la selección y combinación de anticuerpos de diferentes especies en el diseño experimental.
El kit contiene colorantes fluorescentes de tiramina específicos, que incluyen uno o más de los siguientes: TYR-480Plus, TYR-520Plus, TYR-570Plus, TYR-620Plus, TYR-690Plus y TYR-780Plus. Estos colorantes fluorescentes se pueden utilizar de forma individual o en combinación, lo que permite la amplificación de fluorescencia simple, doble, triple o incluso más compleja y el marcaje de anticuerpos homólogos, lo que mejora enormemente la versatilidad del kit.
Nuestro Los kits de tinción multifluorescente Plus (mIHC) pueden lograr hasta 9 colores. Las combinaciones de colorantes se detallan en la siguiente tabla:
Componentes del kit:
Tintes fluorescentes TYR-***Plus, Tampón TSA, anticuerpo secundario universal anti-ratón/conejo de cabra HRP, solución de tinción DAPI (lista para usar), diluyente de anticuerpos, peróxido de hidrógeno al 3%.
Ventajas de la tinción multifluorescente Plus(mIHC) Kits:
1.Alta sensibilidad, de 10 a 50 veces mayor que los kits de análisis TSA convencionales,
2.Tenga cuidado de no tener una señal demasiado fuerte; si la señal es demasiado fuerte, la concentración de tinte/tiempo de reacción/concentración de anticuerpo primario se reducirá.
3.Si la señal es demasiado baja, aumente la concentración de tinte/tiempo de reacción/concentración de anticuerpo primario;
4.Cuanto mayor sea la concentración de los kits Multi Fluorescence Staining Plus (mIHC), mayor será la mejora exponencial de la señal; 1: 50 puede obtener la señal más fuerte y 1:500 es equivalente a la señal de un kit TSA convencional.
5.El kit Multi Fluorescence Staining Plus (mIHC) tiene una gran resistencia a la extinción de colorantes fluorescentes y no requiere exposición a la luz solar durante todo el proceso. Tampoco requiere funcionamiento en un entorno oscuro durante su uso, pero no puede exponerse a la luz solar.
Procedimiento de tinción operatoria:
Ejemplo de imágenes utilizando nuestroKit de tinción multifluorescente Pluss:
(A) Índice de tejido de la trompa de Falopio humana A (570 amarillo) + índice B (520 verde) + índice C (690 polvo);
(B) Índice de tejido de riñón de ratón A (570 amarillo) + índice B (520 verde) + índice C (690 polvo);
(C) Indicador de tumor de cáncer gástrico humano A (polvo 690) + indicador B (rojo 620) + indicador C (amarillo 570) + indicador D (verde 520); (D) Índice de tejido intestinal humano A (amarillo 570) + índice B (verde 520) + índice C (rosa 690) + índice D (rojo 620) + índice E (verde 480).
