اصولی تعارف:
ملٹی پلیکس امیونو ہسٹو کیمسٹری (mIHC) کا اصول یہ ہے کہ ٹشو سیکشنز پر موجود اینٹیجن خاص طور پر بنیادی اینٹی باڈی سے منسلک ہوتا ہے۔ اس کے بعد، ہارسریڈش پیرو آکسیڈیز (HRP) کے ساتھ مل کر ایک ثانوی اینٹی باڈی کو بنیادی اینٹی باڈی کے ساتھ باندھنے کے لیے شامل کیا جاتا ہے۔ ٹائرامین فلوروسینس سبسٹریٹ شامل کرنے کے بعد، nآن ایکٹیویٹڈ ٹائرامین فلوروسین سبسٹریٹس HRP-کیٹالائزڈ ہائیڈروجن پیرو آکسائیڈ کے ذریعے چالو ہوتے ہیں. فلوروسین سبسٹریٹ کے اضافے پر، غیر فعال ٹائرامین فلوروسین سبسٹریٹ ہائیڈروجن پیرو آکسائیڈ کی موجودگی میں HRP کے ذریعے اتپریرک طور پر چالو ہوتا ہے۔ متحرک سبسٹریٹ ہم آہنگی کے ساتھ قریبی پروٹین کی باقیات سے منسلک ہوتا ہے، بشمول ٹرپٹوفن، ہسٹائڈائن، اور ٹائروسین، مستحکم اینٹیجن-فلوریسین بائنڈنگ کی اجازت دیتا ہے۔
ملٹی پلیکس لیبلنگ کے تجربات میں، پچھلے راؤنڈ سے غیر ہم آہنگی سے پابند بنیادی اور ثانوی اینٹی باڈیز کو گرمی کی مرمت یا اینٹی باڈی ایلیونٹ کا استعمال کرکے دھویا جاسکتا ہے۔ اس کے بعد، پرائمری-HRP سیکنڈری اینٹی باڈی کا اگلا دور انکیوبیٹ ہوتا ہے، اس کے بعد ایک مختلف ٹائروسین فلوروسین سبسٹریٹ کا اطلاق ہوتا ہے۔ لیبلنگ کے متعدد مراحل کو حاصل کرنے کے لیے اس عمل کو دہرایا جا سکتا ہے۔ چونکہ ہر نظام میں ایک وقت میں صرف ایک اینٹی باڈی انکیوبیٹ ہوتی ہے، اس لیے اینٹی باڈی کراس ری ایکٹیویٹی یا پرائمری اور سیکنڈری اینٹی باڈیز سے ملنے کی ضرورت کے بارے میں کوئی تشویش نہیں ہے، جس سے تجرباتی ڈیزائن میں مختلف پرجاتیوں سے اینٹی باڈیز کے انتخاب اور ملاپ سے وابستہ چیلنجوں کو نمایاں طور پر کم کیا جاتا ہے۔
کٹ میں مخصوص ٹائرامین فلوروسینٹ رنگ شامل ہیں، جن میں درج ذیل میں سے ایک یا زیادہ شامل ہیں: TYR-480Plus, TYR-520Plus, TYR-570Plus, TYR-620Plus, TYR-690Plus, اور TYR-780Plus۔ ان فلوروسینٹ رنگوں کو انفرادی طور پر یا مجموعہ میں استعمال کیا جا سکتا ہے، جس سے سنگل، ڈبل، ٹرپل، یا اس سے بھی زیادہ پیچیدہ فلوروسینس ایمپلیفیکیشن اور ہومولوجس اینٹی باڈی لیبلنگ کی اجازت ملتی ہے، جس سے کٹ کی استعداد میں بہت اضافہ ہوتا ہے۔
ہماری ملٹی فلوروسینس سٹیننگ پلس(mIHC) کٹس فی الحال 9 رنگوں تک حاصل کر سکتی ہیں۔ ڈائی کے امتزاج کی تفصیل درج ذیل جدول میں دی گئی ہے۔
کٹ کے اجزاء:
TYR-***پلس فلورسنٹ ڈائز، TSA بفر، HRP بکری اینٹی ماؤس/خرگوش یونیورسل سیکنڈری اینٹی باڈی، DAPI سٹیننگ سلوشن (استعمال کے لیے تیار)، اینٹی باڈی ڈیلوئنٹ، 3% ہائیڈروجن پیرو آکسائیڈ۔
ملٹی فلوروسینس سٹیننگ پلس کے فوائد(mIHC) کٹس:
1۔اعلی حساسیت، روایتی TSA پرکھ کٹس سے 10-50 گنا زیادہ،
2.ہوشیار رہیں کہ زیادہ مضبوط سگنل نہ ہو۔ اگر سگنل بہت مضبوط ہے تو، ڈائی کا ارتکاز/رد عمل کا وقت/پرائمری اینٹی باڈی کا ارتکاز کم ہو جائے گا،
3۔اگر سگنل بہت کم ہے تو، ڈائی ارتکاز/رد عمل کا وقت/پرائمری اینٹی باڈی ارتکاز میں اضافہ کریں۔
4.ملٹی فلوروسینس سٹیننگ پلس (mIHC) کٹس کا ارتکاز جتنا زیادہ ہوگا، سگنل میں تیزی سے اضافہ ہوگا۔ 1:50 مضبوط ترین سگنل حاصل کر سکتا ہے، اور 1:500 ایک روایتی TSA کٹ کے سگنل کے برابر ہے۔
5۔ملٹی فلوروسینس سٹیننگ پلس (mIHC) کٹ میں فلوروسینٹ رنگوں کے خلاف مضبوط بجھانے والی مزاحمت ہے، اور پورے عمل کے دوران سورج کی روشنی کی ضرورت نہیں ہے۔ اسے استعمال کے دوران تاریک ماحول میں آپریشن کی بھی ضرورت نہیں ہے، لیکن اسے سورج کی روشنی میں نہیں لایا جا سکتا۔
آپریشنل داغ لگانے کا طریقہ کار:
امیجنگ کے استعمال کی مثال ہمارےملٹی فلوروسینس سٹیننگ پلس کٹs:
(A) انسانی فیلوپین ٹیوب ٹشو انڈیکس A (570 پیلا) + انڈیکس B (520 سبز) + انڈیکس C (690 پاؤڈر)؛
(B) ماؤس کڈنی ٹشو انڈیکس A (570 پیلا) + انڈیکس B (520 سبز) + انڈیکس C (690 پاؤڈر)؛
(C) انسانی گیسٹرک کینسر ٹیومر اشارے A (690 پاؤڈر) + اشارے B (620 سرخ) + اشارے C (570 پیلا) + اشارے D (520 سبز)؛ (D) انسانی آنتوں کے ٹشو انڈیکس A (570 پیلا) + انڈیکس B (520 سبز) + انڈیکس C (690 گلابی) + انڈیکس D (620 سرخ) + انڈیکس E (480 سبز)۔
