Prensip Girişi:
Multiplex İmmünohistokimya (mIHC) ilkesi, doku kesitlerindeki antijenin birincil antikora spesifik olarak bağlanmasıdır. Daha sonra, birincil antikorla bağlanmak için yaban turpu peroksidaz (HRP) ile konjuge edilmiş ikincil bir antikor eklenir. Tiramin floresan substratı eklendikten sonra, Naktive edilmiş tiramin floresin substratları HRP katalizli hidrojen peroksit tarafından aktive edilir. Bir floresin substratının eklenmesi üzerine, aktive olmayan tiramin floresin substratı hidrojen peroksit varlığında HRP tarafından katalitik olarak aktive edilir. Aktifleştirilmiş substrat, triptofan, histidin ve tirozin dahil olmak üzere yakındaki protein kalıntılarına kovalent olarak bağlanır ve stabil antijen-floresin bağlanmasına izin verir.
Multiplex etiketleme deneylerinde, önceki turdan kovalent olmayan şekilde bağlanmış birincil ve ikincil antikorlar ısı onarımı veya bir antikor eluenti kullanılarak yıkanabilir. Daha sonra, bir sonraki birincil-HRP ikincil antikor turu inkübe edilir ve ardından farklı bir tirozin floresan substratı uygulanır. Bu işlem, birden fazla etiketleme adımı elde etmek için tekrarlanabilir. Her sistemde aynı anda yalnızca bir antikor inkübe edildiğinden, antikor çapraz reaksiyonu veya birincil ve ikincil antikorların eşleştirilmesi ihtiyacı konusunda endişe duyulmaz ve bu da deneysel tasarımda farklı türlerden antikorların seçilmesi ve eşleştirilmesiyle ilişkili zorlukları önemli ölçüde azaltır.
Kit, aşağıdakilerden bir veya daha fazlasını içeren spesifik tiramin floresan boyaları içerir: TYR-480Plus, TYR-520Plus, TYR-570Plus, TYR-620Plus, TYR-690Plus ve TYR-780Plus. Bu floresan boyalar tek tek veya kombinasyon halinde kullanılabilir, tek, çift, üçlü veya daha karmaşık floresan amplifikasyonu ve homolog antikor etiketlemesi sağlar ve kitin çok yönlülüğünü büyük ölçüde artırır.
Bizim Çoklu Floresan Boyama Plus(mIHC) Kitleri şu anda 9 renge kadar ulaşabilir. Boya kombinasyonları aşağıdaki tabloda ayrıntılı olarak verilmiştir:
Kit bileşenleri:
TYR-***Artı Floresan Boyalar, TSA tamponu, HRP keçi anti fare/tavşan evrensel sekonder antikor, DAPI Boyama Solüsyonu (Kullanıma hazır), Antikor Seyreltici, %3 hidrojen peroksit.
Çoklu Floresan Boyamanın Avantajları Plus(mIHC) Kitler:
1.Yüksek hassasiyet, geleneksel TSA analiz kitlerinden 10-50 kat daha yüksek,
2.Çok güçlü bir sinyale sahip olmamaya dikkat edin; sinyal çok güçlüyse, boya konsantrasyonu/reaksiyon süresi/birincil antikor konsantrasyonu azalacaktır,
3.Sinyal çok düşükse, boya konsantrasyonunu/reaksiyon süresini/birincil antikor konsantrasyonunu artırın;
4.Çoklu Floresan Boyama Plus (mIHC) Kitlerinin konsantrasyonu ne kadar yüksek olursa, sinyal o kadar üstel olarak güçlenir; 1:50 en güçlü sinyali elde edebilir ve 1:500, geleneksel bir TSA kitinin sinyaline eşdeğerdir.
5.Multi Fluorescence Staining Plus(mIHC) Kit, floresan boyalara karşı güçlü söndürme direncine sahiptir ve tüm süreç boyunca güneş ışığına maruz kalmayı gerektirmez. Ayrıca kullanım sırasında karanlık bir ortamda çalıştırılmasını gerektirmez, ancak güneş ışığına maruz bırakılamaz.
Operasyonel boyama prosedürü:
Görüntüleme örneği kullanımı bizimÇoklu Floresan Boyama Plus KitiS:
(A) İnsan fallop tüpü doku indeksi A (570 sarı) + indeks B (520 yeşil) + indeks C (690 toz);
(B) Fare böbreği dokusu indeksi A (570 sarı)+indeks B (520 yeşil)+indeks C (690 toz);
(C) İnsan mide kanseri tümör göstergesi A (690 toz)+gösterge B (620 kırmızı)+gösterge C (570 sarı)+gösterge D (520 yeşil); (D) İnsan bağırsak dokusu indeksi A (570 sarı)+indeks B (520 yeşil)+indeks C (690 pembe)+indeks D (620 kırmızı)+indeks E (480 yeşil).
