原理介紹:
多重免疫組織化學 (mIHC) 的原理是組織切片上的抗原特異性地與一抗結合。然後,加入與辣根過氧化物酶 (HRP) 結合的二抗,與一抗結合。加入酪胺螢光底物後, n非活化酪胺螢光素底物被 HRP 催化的過氧化氫激活。 加入螢光素底物後,未活化的酪胺螢光素底物在過氧化氫存在下被 HRP 催化活化。活化的底物與附近的蛋白質殘基共價結合,包括色氨酸、組氨酸和酪氨酸,從而實現穩定的抗原-螢光素結合。
在多重標記實驗中,可以使用熱修復或抗體洗脫液洗掉上一輪中非共價結合的一抗和二抗。隨後,孵育下一輪一級 HRP 二抗,然後應用不同的酪胺酸螢光素底物。此過程可重複進行以實現多個標記步驟。由於每個系統中一次只孵育一種抗體,因此不必擔心抗體交叉反應或匹配一抗和二抗,這大大減少了在實驗設計中選擇和匹配不同物種抗體所帶來的挑戰。
該試劑盒含有特定的酪胺螢光染料,包括以下一種或多種:TYR-480Plus、TYR-520Plus、TYR-570Plus、TYR-620Plus、TYR-690Plus 和 TYR-780Plus。這些螢光染料可單獨或組合使用,實現單重、雙重、三重甚至更複雜的螢光擴增及同源抗體標記,大大增強了試劑盒的多功能性。
我們的 多重螢光染色 (mIHC) 試劑盒目前可實現多達 9 種顏色。染料組合詳述如下表:

套件組件:
TYR-***Plus 螢光染料、TSA 緩衝液、HRP 羊抗鼠/兔通用二抗、DAPI 染色溶液(即用型)、抗體稀釋液、3% 過氧化氫。
多重螢光染色的優勢免疫組織化學 (mIHC) 套件:
1.靈敏度高,比傳統 TSA 檢測試劑盒高 10-50 倍,
2.注意不要訊號太強;如果訊號太強,染料濃度/反應時間/一抗濃度將會降低,
3.如果訊號太低,增加染料濃度/反應時間/一抗濃度;
4.多重螢光染色加(mIHC)試劑盒的濃度越高,訊號越呈指數增強; 1:50可以獲得最強訊號,1:500則相當於常規TSA試劑盒的訊號。
5.多重螢光染色加 (mIHC) 試劑盒對螢光染料具有很強的抗淬滅性,整個過程不需要暴露在陽光下。使用時也不需要處於黑暗的環境中操作,但不能暴露在陽光下。
操作染色程序:

使用成像的範例 我們的多重螢光染色試劑盒s:

(A)人類輸卵管組織索引A(570黃色)+索引B(520綠色)+索引C(690粉末);
(B)小鼠腎臟組織索引A(570黃色)+索引B(520綠色)+索引C(690粉末);
(C)人類胃癌腫瘤指示劑A(690粉)+指示劑B(620紅)+指示劑C(570黃)+指示劑D(520綠); (D)人體腸道組織索引A(570黃色)+索引B(520綠色)+索引C(690粉紅色)+索引D(620紅色)+索引E(480綠色)。