Introdução ao princípio:
O princípio da Multiplex Immunohistochemistry (mIHC) é que o antígeno em cortes de tecido se liga especificamente ao anticorpo primário. Então, um anticorpo secundário conjugado com peroxidase de raiz-forte (HRP) é adicionado para se ligar ao anticorpo primário. Após adicionar o substrato de fluorescência de tiramina, nãosubstratos de fluoresceína de tiramina ativados são ativados por peróxido de hidrogênio catalisado por HRP. Após a adição de um substrato de fluoresceína, o substrato de fluoresceína de tiramina não ativado é cataliticamente ativado por HRP na presença de peróxido de hidrogênio. O substrato ativado se liga covalentemente a resíduos de proteína próximos, incluindo triptofano, histidina e tirosina, permitindo a ligação estável antígeno-fluoresceína.
Em experimentos de marcação multiplex, os anticorpos primários e secundários não covalentemente ligados da rodada anterior podem ser lavados usando reparo térmico ou um eluente de anticorpo. Posteriormente, a próxima rodada de anticorpo secundário primário-HRP é incubada, seguida pela aplicação de um substrato de tirosina fluoresceína diferente. Este processo pode ser repetido para atingir várias etapas de marcação. Como apenas um anticorpo é incubado por vez em cada sistema, não há preocupação sobre reatividade cruzada de anticorpos ou a necessidade de combinar anticorpos primários e secundários, reduzindo significativamente os desafios associados à seleção e combinação de anticorpos de diferentes espécies no design experimental.
O kit contém corantes fluorescentes de tiramina específicos, que incluem um ou mais dos seguintes: TYR-480Plus, TYR-520Plus, TYR-570Plus, TYR-620Plus, TYR-690Plus e TYR-780Plus. Esses corantes fluorescentes podem ser usados individualmente ou em combinação, permitindo amplificação de fluorescência simples, dupla, tripla ou até mesmo mais complexa e marcação de anticorpos homólogos, aumentando muito a versatilidade do kit.
Nosso Os kits Multi Fluorescence Staining Plus (mIHC) podem atualmente atingir até 9 cores. As combinações de corantes são detalhadas na tabela abaixo:
Componentes do kit:
Corantes fluorescentes TYR-***Plus, Tampão TSA, anticorpo secundário universal anti-camundongo/coelho HRP de cabra, Solução de coloração DAPI (pronta para uso), Diluente de anticorpo, peróxido de hidrogênio a 3%.
Vantagens da Coloração Multi Fluorescente Plus(mIHC) Kits:
1.Alta sensibilidade, 10-50 vezes maior que os kits de análise TSA convencionais,
2.Tenha cuidado para não ter um sinal muito forte; Se o sinal for muito forte, a concentração do corante/tempo de reação/concentração do anticorpo primário será reduzida,
3.Se o sinal estiver muito baixo, aumente a concentração do corante/tempo de reação/concentração do anticorpo primário;
4.Quanto maior a concentração dos kits Multi Fluorescence Staining Plus (mIHC), maior será o sinal; 1:50 pode obter o sinal mais forte, e 1:500 é equivalente ao sinal de um kit TSA convencional.
5.O Multi Fluorescence Staining Plus(mIHC) Kit tem forte resistência à têmpera de corantes fluorescentes e não requer exposição à luz solar durante todo o processo. Ele também não requer operação em um ambiente escuro durante o uso, mas não pode ser exposto à luz solar.
Procedimento de coloração operacional:
Exemplo de imagem usando nossoKit de coloração multifluorescência Pluse:
(A) Índice de tecido da trompa de Falópio humana A (570 amarelo) + índice B (520 verde) + índice C (690 pó);
(B) Índice de tecido renal de camundongo A (570 amarelo) + índice B (520 verde) + índice C (690 pó);
(C) Indicador de tumor de câncer gástrico humano A (690 pó) + indicador B (620 vermelho) + indicador C (570 amarelo) + indicador D (520 verde); (D) Índice de tecido intestinal humano A (570 amarelo) + índice B (520 verde) + índice C (690 rosa) + índice D (620 vermelho) + índice E (480 verde).
