Wprowadzenie do zasad:
Zasada multipleksowej immunohistochemii (mIHC) polega na tym, że antygen na skrawkach tkanki wiąże się specyficznie z przeciwciałem pierwotnym. Następnie dodawane jest przeciwciało wtórne sprzężone z peroksydazą chrzanową (HRP), aby związać się z przeciwciałem pierwotnym. Po dodaniu substratu fluorescencji tyraminy, NSubstraty fluoresceiny tyraminy aktywowanej są aktywowane przez nadtlenek wodoru katalizowany przez HRP. Po dodaniu substratu fluoresceiny, nieaktywowany substrat fluoresceiny tyraminy jest katalitycznie aktywowany przez HRP w obecności nadtlenku wodoru. Aktywowany substrat kowalencyjnie wiąże się z pobliskimi resztami białkowymi, w tym tryptofanem, histydyną i tyrozyną, umożliwiając stabilne wiązanie antygenu z fluoresceiną.
W eksperymentach znakowania multipleksowego niekowalencyjnie związane przeciwciała pierwotne i wtórne z poprzedniej rundy można wymyć za pomocą naprawy cieplnej lub eluentu przeciwciał. Następnie inkubuje się kolejną rundę przeciwciał wtórnych HRP, po której następuje zastosowanie innego substratu tyrozynowej fluoresceiny. Proces ten można powtórzyć, aby uzyskać wiele etapów znakowania. Ponieważ w każdym systemie inkubuje się tylko jedno przeciwciało na raz, nie ma obaw o reaktywność krzyżową przeciwciał ani o konieczność dopasowania przeciwciał pierwotnych i wtórnych, co znacznie zmniejsza wyzwania związane z wyborem i dopasowaniem przeciwciał z różnych gatunków w projekcie eksperymentalnym.
Zestaw zawiera specyficzne barwniki fluorescencyjne tyraminy, które obejmują jeden lub więcej z następujących: TYR-480Plus, TYR-520Plus, TYR-570Plus, TYR-620Plus, TYR-690Plus i TYR-780Plus. Te barwniki fluorescencyjne można stosować pojedynczo lub w połączeniu, co pozwala na pojedynczą, podwójną, potrójną lub nawet bardziej złożoną amplifikację fluorescencji i homologiczne znakowanie przeciwciał, znacznie zwiększając wszechstronność zestawu.
Nasz Zestawy Multi Fluorescence Staining Plus (mIHC) mogą obecnie osiągnąć do 9 kolorów. Kombinacje barwników są szczegółowo opisane w poniższej tabeli:
Składniki zestawu:
TYR-***Plus barwniki fluorescencyjne, bufor TSA, uniwersalne przeciwciało wtórne kozie HRP przeciwko myszom/królikom, roztwór barwiący DAPI (gotowy do użycia), rozcieńczalnik przeciwciał, 3% nadtlenek wodoru.
Zalety barwienia Multi Fluorescencji Plus(mIHC) Zestawy:
1.Wysoka czułość, 10-50 razy wyższa niż w przypadku konwencjonalnych zestawów do oznaczania TSA,
2.Uważaj, aby nie uzyskać zbyt silnego sygnału. Jeśli sygnał jest zbyt silny, stężenie barwnika/czas reakcji/stężenie przeciwciał pierwotnych zostaną zmniejszone,
3.Jeśli sygnał jest zbyt słaby, zwiększ stężenie barwnika/czas reakcji/stężenie przeciwciał pierwotnych;
4.Im wyższe stężenie zestawu Multi Fluorescence Staining Plus (mIHC), tym wykładniczo wzmacniany jest sygnał; najsilniejszy sygnał można uzyskać przy stężeniu 1:50, a 1:500 odpowiada sygnałowi konwencjonalnego zestawu TSA.
5.Zestaw Multi Fluorescence Staining Plus(mIHC) ma silną odporność na wygaszanie barwników fluorescencyjnych i nie wymaga narażenia na światło słoneczne przez cały proces. Nie wymaga również działania w ciemnym otoczeniu podczas użytkowania, ale nie może być narażony na światło słoneczne.
Procedura barwienia operacyjnego:
Przykład obrazowania przy użyciu naszZestaw do barwienia Multi Fluorescencji PlusS:
(A) Tkanka jajowodu ludzkiego indeks A (570 żółty) + indeks B (520 zielony) + indeks C (690 proszek);
(B) Tkanka nerkowa myszy indeks A (570 żółty) + indeks B (520 zielony) + indeks C (690 proszek);
(C) Wskaźnik nowotworu ludzkiego raka żołądka A (proszek 690) + wskaźnik B (czerwony 620) + wskaźnik C (żółty 570) + wskaźnik D (zielony 520); (D) Wskaźnik tkanki jelitowej człowieka A (żółty 570) + wskaźnik B (zielony 520) + wskaźnik C (różowy 690) + wskaźnik D (czerwony 620) + wskaźnik E (zielony 480).
