원리 소개:
Multiplex Immunohistochemistry(mIHC)의 원리는 조직 절편의 항원이 1차 항체에 특이적으로 결합한다는 것입니다. 그런 다음, 호스래디시 퍼옥시다제(HRP)와 접합된 2차 항체를 첨가하여 1차 항체와 결합합니다. 티라민 형광 기질을 첨가한 후, N활성화된 티라민 플루오레세인 기질은 HRP 촉매화 과산화수소에 의해 활성화됩니다.. 플루오레세인 기질을 첨가하면, 활성화되지 않은 티라민 플루오레세인 기질은 과산화수소가 존재하는 HRP에 의해 촉매적으로 활성화됩니다. 활성화된 기질은 트립토판, 히스티딘, 티로신을 포함한 근처 단백질 잔류물에 공유 결합되어 안정적인 항원-플루오레세인 결합을 가능하게 합니다.
멀티플렉스 라벨링 실험에서 이전 라운드의 비공유 결합된 1차 및 2차 항체는 열 복구 또는 항체 용출액을 사용하여 세척할 수 있습니다. 그런 다음 다음 라운드의 1차-HRP 2차 항체를 배양한 다음 다른 티로신 플루오레세인 기질을 적용합니다. 이 프로세스를 반복하여 여러 라벨링 단계를 달성할 수 있습니다. 각 시스템에서 한 번에 하나의 항체만 배양하므로 항체 교차 반응성이나 1차 및 2차 항체를 일치시킬 필요가 없으므로 실험 설계에서 다른 종의 항체를 선택하고 일치시키는 것과 관련된 과제가 크게 줄어듭니다.
키트에는 다음 중 하나 이상을 포함하는 특정 티라민 형광 염료가 들어 있습니다: TYR-480Plus, TYR-520Plus, TYR-570Plus, TYR-620Plus, TYR-690Plus, TYR-780Plus. 이러한 형광 염료는 개별적으로 또는 조합하여 사용할 수 있어 단일, 이중, 삼중 또는 훨씬 더 복잡한 형광 증폭 및 상동 항체 표지가 가능하여 키트의 다양성이 크게 향상됩니다.
우리의 Multi Fluorescence Staining Plus(mIHC) 키트는 현재 최대 9가지 색상을 구현할 수 있습니다. 염색 조합은 아래 표에 자세히 나와 있습니다.
키트 구성품:
TYR-***Plus 형광염료, TSA 완충액, HRP 염소 항 마우스/토끼 범용 2차 항체, DAPI 염색 용액(즉시 사용 가능), 항체 희석제, 3% 과산화수소.
다중 형광 염색 플러스의 장점(mIHC) 키트:
1.높은 민감도, 기존 TSA 검사 키트보다 10~50배 더 높음
2.신호가 너무 강하지 않도록 주의하세요. 신호가 너무 강하면 염료 농도/반응 시간/1차 항체 농도가 감소합니다.
3.신호가 너무 낮으면 염료 농도/반응 시간/1차 항체 농도를 높입니다.
4.Multi Fluorescence Staining Plus(mIHC) 키트의 농도가 높을수록 신호는 기하급수적으로 향상됩니다. 1:50으로 가장 강한 신호를 얻을 수 있으며, 1:500은 기존 TSA 키트의 신호와 동일합니다.
5.멀티 형광 염색 플러스(mIHC) 키트는 형광 염료에 대한 강력한 퀀칭 저항성을 가지고 있으며, 전체 공정 동안 햇빛에 노출될 필요가 없습니다. 또한 사용 중에 어두운 환경에서 작동할 필요가 없지만 햇빛에 노출될 수 없습니다.
작업 염색 절차:
이미징을 사용한 예 우리의멀티 형광 염색 플러스 키트에스:
(A) 인간 나팔관 조직 지수 A(570 노란색) + 지수 B(520 녹색) + 지수 C(690 분말)
(B) 마우스 신장 조직 지수 A(570 노란색) + 지수 B(520 녹색) + 지수 C(690 분말);
(C) 인간 위암 종양 지표 A(690분말)+지표 B(620적색)+지표 C(570황색)+지표 D(520녹색); (D) 인간 장내 조직 지표 A(570황색)+지표 B(520녹색)+지표 C(690분홍색)+지표 D(620적색)+지표 E(480녹색).
