原則の紹介:
マルチプレックス免疫組織化学（mIHC）の原理は、組織切片上の抗原が一次抗体に特異的に結合するというものです。次に、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（HRP）と結合した二次抗体が一次抗体と結合するように添加されます。チラミン蛍光基質を添加した後、 ん活性化チラミンフルオレセイン基質はHRP触媒過酸化水素によって活性化される。 フルオレセイン基質を加えると、非活性化チラミンフルオレセイン基質は過酸化水素の存在下で HRP によって触媒活性化されます。活性化された基質は、トリプトファン、ヒスチジン、チロシンなどの近くのタンパク質残基に共有結合し、抗原とフルオレセインとの安定した結合を可能にします。
マルチプレックス標識実験では、前回のラウンドで非共有結合した一次抗体と二次抗体を、熱修復または抗体溶出液を使用して洗い流すことができます。その後、次のラウンドの一次 HRP 二次抗体をインキュベートし、その後、異なるチロシンフルオレセイン基質を適用します。このプロセスを繰り返して、複数の標識ステップを達成できます。各システムで一度にインキュベートされる抗体は 1 つだけなので、抗体の交差反応性や一次抗体と二次抗体を一致させる必要性について心配する必要はなく、実験設計で異なる種からの抗体を選択して一致させるという課題が大幅に軽減されます。
このキットには、TYR-480Plus、TYR-520Plus、TYR-570Plus、TYR-620Plus、TYR-690Plus、TYR-780Plus のうち 1 つ以上を含む特定のチラミン蛍光色素が含まれています。これらの蛍光色素は、個別に使用することも、組み合わせて使用することもできます。これにより、単一、二重、三重、またはさらに複雑な蛍光増幅と相同抗体の標識が可能になり、キットの汎用性が大幅に向上します。
私たちの マルチ蛍光染色プラス (mIHC) キットは現在、最大 9 色を実現できます。染料の組み合わせの詳細は、以下の表をご覧ください。
キットのコンポーネント:
TYR-***Plus蛍光染料、TSA バッファー、HRP ヤギ抗マウス/ウサギユニバーサル二次抗体、DAPI 染色溶液 (すぐに使用可能)、抗体希釈液、3% 過酸化水素。
マルチ蛍光染色プラスの利点(mIHC) キット:
1.従来のTSAアッセイキットより10～50倍高い感度
2.シグナルが強すぎないように注意してください。シグナルが強すぎると、色素濃度/反応時間/一次抗体濃度が低下します。
3.信号が低すぎる場合は、色素濃度/反応時間/一次抗体濃度を上げます。
4.マルチ蛍光染色プラス (mIHC) キットの濃度が高くなるほど、シグナルは指数関数的に強化されます。1:50 で最も強いシグナルが得られ、1:500 は従来の TSA キットのシグナルに相当します。
5.マルチ蛍光染色プラス（mIHC）キットは蛍光染料に対する消光耐性が強く、プロセス全体を通して日光にさらされる必要がありません。また、使用中に暗い環境で操作する必要もありませんが、日光にさらされることはありません。
操作染色手順:
使用イメージングの例 私たちのマルチ蛍光染色プラスキットs:
(A) ヒト卵管組織指数A（570黄色）+指数B（520緑色）+指数C（690粉末）
(B) マウス腎臓組織インデックスA（570黄色）+インデックスB（520緑色）+インデックスC（690粉末）
(C) ヒト胃癌腫瘍指標A（690粉末）+指標B（620赤）+指標C（570黄色）+指標D（520緑）；（D）ヒト腸組織指標A（570黄色）+指標B（520緑）+指標C（690ピンク）+指標D（620赤）+指標E（480緑）。
