Pengenalan Prinsip:
Prinsip Multiplex Immunohistochemistry (mIHC) adalah antigen pada potongan jaringan secara spesifik mengikat antibodi primer. Kemudian, antibodi sekunder yang dikonjugasikan dengan horseradish peroxidase (HRP) ditambahkan untuk mengikat antibodi primer. Setelah menambahkan substrat fluoresensi tyramine, Nsubstrat fluorescein tyramine yang tidak aktif diaktifkan oleh hidrogen peroksida yang dikatalisis oleh HRP. Setelah penambahan substrat fluorescein, substrat fluorescein tyramine yang tidak teraktivasi diaktifkan secara katalitik oleh HRP dengan adanya hidrogen peroksida. Substrat yang teraktivasi tersebut mengikat secara kovalen ke residu protein di dekatnya, termasuk triptofan, histidin, dan tirosin, sehingga memungkinkan pengikatan antigen-fluorescein yang stabil.
Dalam percobaan pelabelan multipleks, antibodi primer dan sekunder yang terikat secara non-kovalen dari putaran sebelumnya dapat dibersihkan menggunakan perbaikan panas atau eluen antibodi. Selanjutnya, putaran berikutnya dari antibodi sekunder HRP primer diinkubasi, diikuti dengan penerapan substrat tirosin fluorescein yang berbeda. Proses ini dapat diulang untuk mencapai beberapa langkah pelabelan. Karena hanya satu antibodi yang diinkubasi pada satu waktu di setiap sistem, tidak ada kekhawatiran tentang reaktivitas silang antibodi atau kebutuhan untuk mencocokkan antibodi primer dan sekunder, yang secara signifikan mengurangi tantangan yang terkait dengan pemilihan dan pencocokan antibodi dari spesies yang berbeda dalam desain eksperimen.
Kit ini berisi pewarna fluoresensi tyramine tertentu, yang mencakup satu atau beberapa dari berikut ini: TYR-480Plus, TYR-520Plus, TYR-570Plus, TYR-620Plus, TYR-690Plus, dan TYR-780Plus. Pewarna fluoresensi ini dapat digunakan secara terpisah atau dalam kombinasi, yang memungkinkan amplifikasi fluoresensi tunggal, ganda, rangkap tiga, atau bahkan lebih kompleks serta pelabelan antibodi homolog, sehingga sangat meningkatkan fleksibilitas kit ini.
Kita Kit Multi Fluorescence Staining Plus (mIHC) saat ini dapat menghasilkan hingga 9 warna. Kombinasi pewarna dirinci dalam tabel di bawah ini:
Komponen kit:
Pewarna Fluoresens TYR-***Plus, Penyangga TSA, Antibodi sekunder universal HRP goat anti tikus/kelinci, Larutan Pewarnaan DAPI (Siap pakai), Pengencer Antibodi, Hidrogen peroksida 3%.
Keuntungan Pewarnaan Multi Fluoresensi Plus(IHK) Perlengkapan:
1.Sensitivitas tinggi, 10-50 kali lebih tinggi dari kit uji TSA konvensional,
2.Hati-hati jangan sampai sinyalnya terlalu kuat; Jika sinyalnya terlalu kuat, konsentrasi pewarna/waktu reaksi/konsentrasi antibodi primer akan berkurang,
3.Jika sinyalnya terlalu rendah, tingkatkan konsentrasi pewarna/waktu reaksi/konsentrasi antibodi primer;
4.Semakin tinggi konsentrasi Multi Fluorescence Staining Plus (mIHC) Kit, semakin kuat sinyalnya; 1:50 dapat memperoleh sinyal terkuat, dan 1:500 setara dengan sinyal kit TSA konvensional.
5.Kit Multi Fluorescence Staining Plus (mIHC) memiliki ketahanan pendinginan yang kuat terhadap pewarna fluoresensi, dan tidak memerlukan paparan sinar matahari selama seluruh proses. Kit ini juga tidak memerlukan pengoperasian di lingkungan yang gelap selama penggunaan, tetapi tidak dapat terkena sinar matahari.
Prosedur pewarnaan operasional:
Contoh pencitraan menggunakan kitaKit Pewarnaan Multi Fluoresensi PlusS:
(A) Indeks jaringan tuba falopi manusia A (570 kuning) + indeks B (520 hijau) + indeks C (690 bubuk);
(B) Indeks jaringan ginjal tikus A (570 kuning) + indeks B (520 hijau) + indeks C (690 bubuk);
(C) Indikator tumor kanker lambung manusia A (690 bubuk) + indikator B (620 merah) + indikator C (570 kuning) + indikator D (520 hijau); (D) Indeks jaringan usus manusia A (570 kuning) + indeks B (520 hijau) + indeks C (690 merah muda) + indeks D (620 merah) + indeks E (480 hijau).
