নীতি ভূমিকা:
মাল্টিপ্লেক্স ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রি (mIHC) এর নীতি হল টিস্যু বিভাগের অ্যান্টিজেন বিশেষভাবে প্রাথমিক অ্যান্টিবডির সাথে আবদ্ধ হয়। তারপর, হর্সরাডিশ পেরোক্সিডেস (HRP) এর সাথে সংযুক্ত একটি সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি প্রাথমিক অ্যান্টিবডির সাথে আবদ্ধ হওয়ার জন্য যোগ করা হয়। টাইরামাইন ফ্লুরোসেন্স সাবস্ট্রেট যোগ করার পর, এনসক্রিয় টাইরামাইন ফ্লুরোসিন সাবস্ট্রেটগুলি এইচআরপি-অনুঘটক হাইড্রোজেন পারক্সাইড দ্বারা সক্রিয় হয়. ফ্লুরোসিন সাবস্ট্রেট যোগ করার পর, অ-সক্রিয় টাইরামাইন ফ্লুরোসিন সাবস্ট্রেট হাইড্রোজেন পারক্সাইডের উপস্থিতিতে HRP দ্বারা অনুঘটকভাবে সক্রিয় হয়। সক্রিয় সাবস্ট্রেটটি সহযোজিতভাবে ট্রিপটোফান, হিস্টিডিন এবং টাইরোসিন সহ নিকটবর্তী প্রোটিন অবশিষ্টাংশের সাথে আবদ্ধ হয়, যা স্থিতিশীল অ্যান্টিজেন-ফ্লুরোসিন বন্ধনের অনুমতি দেয়।
মাল্টিপ্লেক্স লেবেলিং পরীক্ষায়, পূর্ববর্তী রাউন্ডের নন-কোভ্যালেন্টলি বাউন্ড প্রাইমারি এবং সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডিগুলিকে তাপ মেরামত বা অ্যান্টিবডি ইলুয়েন্ট ব্যবহার করে ধুয়ে ফেলা যেতে পারে। পরবর্তী রাউন্ডে, প্রাইমারি-এইচআরপি সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি ইনকিউবেটেড করা হয়, তারপরে একটি ভিন্ন টাইরোসিন ফ্লুরোসেসিন সাবস্ট্রেট প্রয়োগ করা হয়। একাধিক লেবেলিং ধাপ অর্জনের জন্য এই প্রক্রিয়াটি পুনরাবৃত্তি করা যেতে পারে। যেহেতু প্রতিটি সিস্টেমে একবারে শুধুমাত্র একটি অ্যান্টিবডি ইনকিউবেটেড থাকে, তাই অ্যান্টিবডি ক্রস-রিঅ্যাক্টিভিটি বা প্রাথমিক এবং সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডিগুলির সাথে মিলের প্রয়োজনীয়তা সম্পর্কে কোনও উদ্বেগ নেই, যা পরীক্ষামূলক নকশায় বিভিন্ন প্রজাতির অ্যান্টিবডি নির্বাচন এবং মিলের সাথে সম্পর্কিত চ্যালেঞ্জগুলিকে উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করে।
কিটটিতে নির্দিষ্ট টাইরামাইন ফ্লুরোসেন্ট রঞ্জক রয়েছে, যার মধ্যে নিম্নলিখিতগুলির মধ্যে একটি বা একাধিক রয়েছে: TYR-480Plus, TYR-520Plus, TYR-570Plus, TYR-620Plus, TYR-690Plus, এবং TYR-780Plus। এই ফ্লুরোসেন্ট রঞ্জকগুলি পৃথকভাবে বা সংমিশ্রণে ব্যবহার করা যেতে পারে, যা একক, দ্বিগুণ, তিনগুণ, বা আরও জটিল ফ্লুরোসেন্স পরিবর্ধন এবং সমজাতীয় অ্যান্টিবডি লেবেলিংয়ের অনুমতি দেয়, যা কিটের বহুমুখীতাকে ব্যাপকভাবে বৃদ্ধি করে।
আমাদের মাল্টি ফ্লুরোসেন্স স্টেইনিং প্লাস (mIHC) কিটগুলি বর্তমানে 9 টি পর্যন্ত রঙ তৈরি করতে পারে। রঞ্জক সংমিশ্রণগুলি নীচের সারণীতে বিস্তারিতভাবে দেখানো হয়েছে:
কিট উপাদান:
TYR-***প্লাস ফ্লুরোসেন্ট রঞ্জক পদার্থ, টিএসএ বাফার, এইচআরপি ছাগলের মাউস/খরগোশের বিরুদ্ধে ইউনিভার্সাল সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি, ডিএপিআই স্টেইনিং সলিউশন (ব্যবহারের জন্য প্রস্তুত), অ্যান্টিবডি ডিলুয়েন্ট, ৩% হাইড্রোজেন পারক্সাইড।
মাল্টি ফ্লুরোসেন্স স্টেইনিং প্লাসের সুবিধা(এমআইএইচসি) কিটস:
১.উচ্চ সংবেদনশীলতা, প্রচলিত TSA অ্যাসে কিটের তুলনায় ১০-৫০ গুণ বেশি,
২.খুব বেশি শক্তিশালী সংকেত না থাকার ব্যাপারে সতর্ক থাকুন; যদি সংকেত খুব বেশি শক্তিশালী হয়, তাহলে রঞ্জক ঘনত্ব/প্রতিক্রিয়া সময়/প্রাথমিক অ্যান্টিবডি ঘনত্ব হ্রাস পাবে,
৩.যদি সংকেত খুব কম হয়, তাহলে রঞ্জক ঘনত্ব/প্রতিক্রিয়া সময়/প্রাথমিক অ্যান্টিবডি ঘনত্ব বাড়ান;
৪.মাল্টি ফ্লুরোসেন্স স্টেইনিং প্লাস (mIHC) কিটগুলির ঘনত্ব যত বেশি হবে, সংকেত তত বেশি সূচকীয়ভাবে উন্নত হবে; 1:50 সবচেয়ে শক্তিশালী সংকেত পেতে পারে এবং 1:500 একটি প্রচলিত TSA কিটের সংকেতের সমতুল্য।
৫।মাল্টি ফ্লুরোসেন্স স্টেইনিং প্লাস (mIHC) কিটটি ফ্লুরোসেন্ট রঞ্জক পদার্থের প্রতি শক্তিশালী নিবারণ প্রতিরোধ ক্ষমতা সম্পন্ন এবং পুরো প্রক্রিয়া জুড়ে সূর্যালোকের সংস্পর্শে আসার প্রয়োজন হয় না। ব্যবহারের সময় এটি অন্ধকার পরিবেশে পরিচালনা করার প্রয়োজন হয় না, তবে সূর্যালোকের সংস্পর্শেও আসে না।
কার্যকরী রঙিন পদ্ধতি:
ইমেজিং ব্যবহারের উদাহরণ আমাদেরমাল্টি ফ্লুরোসেন্স স্টেইনিং প্লাস কিটগুলি:
(ক) হিউম্যান ফ্যালোপিয়ান টিউব টিস্যু সূচক A (570 হলুদ)+সূচক B (520 সবুজ)+সূচক C (690 পাউডার);
(খ) মাউস কিডনি টিস্যু সূচক A (570 হলুদ) + সূচক B (520 সবুজ) + সূচক C (690 পাউডার);
(গ) মানুষের পাকস্থলীর ক্যান্সার টিউমার সূচক A (690 পাউডার)+সূচক B (620 লাল)+সূচক C (570 হলুদ)+সূচক D (520 সবুজ); (ঘ) মানুষের অন্ত্রের টিস্যু সূচক A (570 হলুদ)+সূচক B (520 সবুজ)+সূচক C (690 গোলাপী)+সূচক D (620 লাল)+সূচক E (480 সবুজ)।
